Résultats des tests biologiques

L'objectif de cette investigation était d'étudier sur des souris l'effet de l'eau activée MRET comme agent potentiel pour la prévention et le traitement de deux types de maladies oncologiques (modèles de laboratoire de tumeur ascitique d'Ehrlich et forme ascitique de sarcome). Un effet positif significatif de l'eau activée MRET concernant la résistance tumorale chez les animaux a été observé dans les expériences menées sur 500 souris (22 groupes avec 20 souris dans chaque groupe et 10 groupes avec 5 souris dans chaque groupe). Les meilleurs résultats ont été observés dans les groupes de souris avec eau MRET activée pendant 30 minutes (régime optimal d'activation). L'efficacité anti-tumorale substantielle a été confirmée par un niveau très élevé de réduction du Nombre Total de Cellules Tumorales Viables de 76% en régime de «traitement préventif» et de 55% en régime de «traitement thérapeutique». La durée de vie des souris qui ont reçu l'eau activée optimale a augmenté de 61% en régime de «traitement préventif» et de 43% en régime de «traitement thérapeutique». L'effet anti-tumoral significatif de l'Eau Activée MRET sur les souris était proche de l'action des agents de chimiothérapie et a permis d'éviter les effets secondaires qui suivent typiquement le traitement de chimiothérapie en oncologie.

Les résultats de l'investigation de l'application de l'eau activée par le processus non-ionisant de Technologie d'Effet de Résonance Moléculaire (MRET) pour le traitement préventif et l'amélioration de la résistance tumorale des animaux à deux types de maladies oncologiques in vivo sur 500 souris sont présentés. La recherche menée sur les paramètres physiques de l'eau a confirmé que le processus d'activation MRET a contribué à une modification substantielle des propriétés physico-moléculaires de base de l'eau distillée (réduction substantielle de la viscosité comme fonction de la pression tangentielle appliquée, ainsi qu'une diminution substantielle de la conductivité électrique et de la permittivité diélectrique comme fonctions des fréquences du champ électromagnétique appliqué). L'effet positif significatif de l'eau activée MRET sur la résistance tumorale des animaux a été observé dans le processus de cette investigation dans tous les groupes de souris sur différentes fractions d'eau activée. Les meilleurs résultats ont été observés dans les groupes de souris avec eau MRET activée pendant 30 minutes (régime optimal d'activation). Les résultats étaient meilleurs en régime de «traitement préventif» comparé au régime de «traitement thérapeutique». De plus, cette investigation a confirmé que la préservation à long terme de l'eau activée à basse température (autour de 0°C) pendant 45 jours a diminué son efficacité anti-tumorale mais l'a laissée à un niveau significativement élevé comparé aux autres fractions. Les résultats des tests pointent vers le mécanisme dual de l'effet de l'eau MRET sur les tumeurs : la prévention et l'inhibition de la croissance tumorale ensemble avec la réduction de la quantité de cellules tumorales viables. L'effet anti-tumoral significatif de l'eau distillée activée MRET sur les souris était proche de l'action des agents de chimiothérapie et a permis d'éviter les effets secondaires qui suivent typiquement le traitement de chimiothérapie de l'oncologie.

Dans le processus d'investigation de l'activité cytotoxique des cellules NK, une augmentation significative des niveaux de cytotoxicité des lymphocytes a été observée lorsque les souris donneuses ont été traitées avec de l'eau MRET activée pendant 30 minutes. Les résultats ont également montré que l'extension de l'application de l'eau MRET de 14 jours à 21 jours a significativement augmenté la valeur de l'indice de cytotoxicité. Il est possible d'admettre que l'extension du temps d'application de l'eau MRET mènera à des niveaux plus élevés d'amélioration de l'activité des cellules NK. Ainsi, l'application de l'eau activée MRET peut être une approche assez prometteuse pour la stimulation non-médicamenteuse des vaccins d'immunisation des cellules NK.

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Les investigations in vitro sur des cellules PMBC normales (cellules mononucléaires du sang périphérique) et sur des cellules cancéreuses HeLa (lignée cellulaire ATCC # CCL-2 adénocarcinome cervical) ont été menées sous la supervision de Patrick Pezzoli, Ph.D. à AltheaDx Technologies, San Diego, USA. Les expériences ont analysé : cellules lysées à 0 heure, cellules cultivées pendant 24 heures en milieu non traité et cellules cultivées pendant 24 heures en milieu traité avec l'activateur MRET pendant 30 minutes. Des échantillons d'ADN de chaque lot ont été traités et les données résultantes ont été analysées en utilisant Affymetrix Genotyping Console 3.0 pour obtenir les appels de génotype et les appels de nombre de copies. Les comptages de cellules et la % de viabilité ont été obtenus en utilisant la technique d'exclusion du Bleu Trypan.

Les données expérimentales n'ont révélé aucune différence entre l'heure zéro (témoin), les échantillons traités MRET et non traités en termes de génotypes et d'appels de nombre de copies. Ainsi, l'activation MRET du milieu à base d'eau n'a induit aucun changement dans les cellules au niveau génétique.

Les études ont montré qu'en milieu activé MRET la viabilité des cellules normales (PBMC) était plus élevée (Tableau 1), et la viabilité des cellules cancéreuses (HeLa) était plus faible (Tableau 2) comparée à leur viabilité en milieu non traité.

Pour les cellules normales (PBMC), les changements dans les comptages de cellules étaient similaires pour le milieu non traité et traité MRET (Fig 1). Ainsi, le traitement MRET n'a pas affecté la croissance des cellules normales.

Pour les cellules cancéreuses (HeLa), les données expérimentales ont révélé une inhibition significative de la croissance des cellules cancéreuses en milieu traité MRET. La croissance des cellules cancéreuses viables a été inhibée de 54% en milieu traité MRET comparé au milieu non traité (Fig 2).
Fig 1 : Comptages de cellules PBMC viables après 24 heures d'incubation Fig 2 : Comptages de cellules HeLa viables après 24 heures d'incubation
Les résultats de la recherche AltheaDx sur les cellules cancéreuses HeLa in vitro soutiennent les résultats obtenus précédemment dans l'investigation concernant les effets de l'eau MRET sur la résistance tumorale dans le modèle animal. L'étude sur 500 souris a été menée sous la supervision du Professeur V. Vysotskii, S. Olishevsky, Ph.D. et Y. Yanish, Ph.D. à l'Institut de Pathologie Expérimentale, Oncologie et Radiobiologie de Kiev de l'Académie des Sciences d'Ukraine. Elle a montré une inhibition substantielle de la croissance des cellules tumorales viables suite à la consommation d'eau MRET. Au cours de cette investigation, les groupes de souris en «régime préventif» ont ingéré de l'eau MRET pendant 2 semaines avant l'inoculation des cellules cancéreuses du carcinome d'Ehrlich et pendant 3 semaines après l'inoculation. Les groupes de souris en «régime thérapeutique» ont ingéré de l'eau MRET seulement pendant 3 semaines après l'inoculation des cellules cancéreuses du carcinome d'Ehrlich. Suite à la consommation d'eau MRET activée pendant 30 minutes (le temps optimal d'activation), la croissance des cellules tumorales viables a été inhibée de 76% en «régime préventif» et de 55% en «régime thérapeutique.»

En conclusion, il est possible de dire que les études menées à AltheaDx Technology ont confirmé que l'eau activée MRET n'affectait pas les cellules au niveau génétique ; elle affectait la morphologie des cellules normales de manière positive en augmentant leur viabilité et promouvait une inhibition significative de la croissance des cellules cancéreuses.

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Une observation clinique a été menée sur un patient subissant un traitement de chimiothérapie pour un cancer naso-pharyngé métastasé. Sur une base régulière, les comptages de GB diminuent généralement à un niveau très bas. Le rebond des GB depuis cette plage basse prend environ 3-5 semaines. L'ingestion d'eau MRET a empêché la diminution des comptages de GB à leur niveau le plus bas et a aidé à retrouver le niveau pré-chimiothérapie dans un période de temps inhabituellement courte de 3 jours.

Ainsi, l'observation clinique a révélé qu'au 10ème jour après le début de la chimiothérapie (en 3 jours après que les comptages de GB aient chuté à 10% du niveau pré-chimiothérapie) les comptages de GB ont rebondi à 93% de leur niveau pré-chimiothérapie. En conformité avec les critères de Distribution de Student, le rebond des GB était supérieur à 70% du niveau pré-chimiothérapie avec p=0.05.

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Les tests menés au Laboratoire Environnemental C.A.I., Carlsbad, USA ont révélé la réduction significative de la quantité de coliformes totaux suite au processus d'activation MRET. Dans l'eau de pluie activée pendant 30 minutes, la quantité de coliformes totaux a diminué de 86% après le processus d'activation de l'eau. Ce test confirme que l'eau MRET agit comme agent antibactérien, fournissant un effet stérilisant.

La recherche a été menée à l'Institut de Microbiologie et Virologie de Kiev de l'Académie des Sciences d'Ukraine.

L'investigation a révélé l'effet significatif du milieu nutritif activé MRET en environnement aérobie sur le processus de croissance et de reproduction des microorganismes E.coli, leur division, la taille des colonies et la modification des formes des cellules de culture. Il a été observé qu'à faible concentration initiale de cellules de la culture investiguée Escherichia coli K-12, le milieu nutritif MRET activé pendant 30 minutes et 60 minutes a inhibé la croissance de la culture 27 et 303 fois respectivement pendant les 25 heures d'expérience.

La vue initiale des boîtes de Petri avec différentes fractions de milieu nutritif au début de l'expérience est présentée sur la Fig 1.

Fig 1 : Boîtes de Petri au début de l'expérience. Une quantité identique très faible de cellules Escherichia coli K-12 a été introduite sur la surface du milieu nutritif non activé des boîtes témoins et sur la surface des boîtes avec milieu nutritif activé MRET pendant 30 et 60 minutes(tact=0.5h et tact=1.0h) en environnement aérobie. Il n'y a pas de colonies de microorganismes dans les boîtes de Petri au début de l'expérience.

Les boîtes de Petri avec colonies cultivées et paramètres statistiques des colonies après 23 heures d'expériences sont présentées sur la Fig 2 : (a) milieu nutritif non activé (témoin) ; (b) milieu nutritif activé pendant 30 minutes ; (c) milieu nutritif activé pendant 60 minutes. Les boîtes de Petri après 29 heures d'expérience sont montrées sur la Fig 3. L'inhibition significative de la croissance d'E.coli dans les échantillons activés a été révélée et elle a confirmé l'effet bactériostatique fort du milieu activé MRET.

Cette expérience montre que le processus d'activation MRET a un effet bactériostatique très fort sur les microorganismes E.coli conditionnellement pathogènes et que l'inhibition de la croissance d'E.coli est plus efficace lorsque le temps d'activation est augmenté. Il a été observé qu'à faible concentration initiale de cellules d'E.coli dans le milieu nutritif, l'activation MRET pendant 30 minutes et 60 minutes de période de temps a inhibé la croissance de la culture N_C/N_0.5 = 27 et N_C/N_1.0 = 303 fois respectivement après 25 heures d'expérience (Fig 4). Par conséquent, le niveau d'activité bactériostatique était de 96% dans le milieu nutritif activé pendant 30 minutes et de 99,7% dans le milieu activé pendant 60 minutes. Ainsi, la corrélation directe entre l'activité bactériostatique du milieu nutritif activé MRET et le temps d'activation a été confirmée.

Fig 4 : L'inhibition de la croissance d'E.coli en environnement aérobie : 303 fois (t_act=1.0 heure) et 27 fois (t_act=0.5 heure) après 25 heures d'expérience (couleur bleue — témoin, rouge — 30 minutes et verte — 60 minutes milieu activé MRET).

Cette expérience a également révélé l'effet fort de l'eau activée MRET sur le processus de division des microorganismes E.coli, la modification des formes des cellules de culture et la taille des colonies. Il a été observé qu'une des raisons de la croissance anormalement faible des bactéries E.coli était liée à la modification du processus de division cellulaire dans le milieu nutritif activé MRET. Dans le processus de croissance et de reproduction, un grand nombre de cellules ne se séparaient pas les unes des autres et des alignements linéaires consistant en 2-3 cellules appariées séquentiellement étaient formés. Les cellules de culture cultivées en milieu non activé et activé MRET sont montrées sur la Fig 5 et Fig 6 respectivement.

II. L'effet de l'eau MRET sur l'activité métabolique des bactéries E.coli en environnement aérobie et anaérobie

L'activité réductrice est une caractéristique intégrale de l'activité métabolique des microorganismes et elle est mesurée à l'aide de l'indicateur de couleur Sodium Resasurine en degré de décoloration en pourcentage (violet = 0%, rouge = 50%, transparent = 100%). L'activité réductrice des bactéries E.coli a été réduite jusqu'à 3 fois dans l'eau activée MRET pendant 30 minutes et jusqu'à 1.6 fois dans l'eau activée pendant 60 minutes pendant les premières 6 heures d'expérience en environnement aérobie (Fig 7 et 8).

Fig 7 : Test comparatif sur l'activité métabolique (réductrice) d'E.coli (échantillons témoins, eau activée MRET 30 et 60 minutes) en environnement aérobie : R — activité réductrice (en eau témoin, 0.5 heure et 1.0 heure activée MRET), K — activité réductrice relative, D — densité optique.

Fig 8 : Activité Réductrice Relative d'E.coli dans l'eau MRET activée pendant 0.5 heure (K_0.5=R_0.5/R_C — couleur rouge) et pendant 1.0 heure (K_1.0=R_1.0/R_C — couleur verte) comparé aux échantillons témoins non activés (K_C=1 — couleur bleue) en environnement aérobie.

Cette expérience a montré qu'il n'y avait pas de corrélation directe entre l'inhibition de l'activité métabolique (réductrice) et l'inhibition de la croissance d'E.coli (activité bactériostatique) dans l'eau activée MRET. L'effet bactériostatique est substantiellement plus élevé dans l'eau activée pendant 60 minutes et l'inhibition de l'activité réductrice pendant les premières 3 heures est plus élevée dans l'eau activée pendant 30 minutes. Ainsi, cette expérience a révélé que le temps optimal d'activation pour l'inhibition maximale de l'activité métabolique des bactéries E.coli en environnement aérobie est de 30 minutes. Le même temps optimal d'activation a été trouvé dans le processus d'une autre investigation concernant l'application de l'eau activée MRET pour le traitement préventif et l'amélioration de la résistance tumorale in vivo sur 500 souris pour deux types de cancer menée à l'Institut de Pathologie Expérimentale, Oncologie et Radiobiologie de Kiev de l'Académie des Sciences d'Ukraine.

Prenant en considération qu'une petite population de bactéries pathogènes, telles qu'E.coli, est généralement présente dans des associations microbiennes complexes dans l'intestin du corps, le test sur l'activité métabolique des bactéries E.coli en environnement anaérobie a été mené. L'environnement anaérobie simule les conditions environnementales similaires aux conditions dans l'intestin des humains et des animaux. L'investigation a montré que l'activité réductrice des bactéries E.coli en environnement anaérobie ne changeait pratiquement pas (Fig 9 et 10).

Fig 9 : Test comparatif sur l'activité métabolique (réductrice) d'E.coli (échantillons témoins, eau activée MRET 0.5 heure et 1.0 heure, K_STER — référence à la stérilité) en environnement anaérobie : R — activité réductrice (en Témoin, 0.5 heure et 1.0 heure eau activée MRET), K — activité réductrice relative, D — densité optique, V — volume de gaz dans les bouteilles.

Fig 10 : Activité Réductrice d'E.coli dans l'eau activée MRET 30 et 60 minutes et dans les échantillons témoins non activés (R_0.5 — couleur rouge, R_1.0 — couleur verte, R_C — couleur bleue) en environnement anaérobie.

Cette expérience a révélé que le processus d'activation MRET n'avait aucun effet significatif sur l'activité réductrice des bactéries E.coli en environnement anaérobie.

Afin de simuler les conditions environnementales similaires aux conditions dans l'intestin des humains et des animaux, le test sur l'activité métabolique des associations microbiennes a été mené en environnement anaérobie. Il a été trouvé que l'eau activée MRET augmentait substantiellement l'activité réductrice des associations microbiennes complexes pendant les premières heures d'expérience (Fig 11).

Fig 11 : Test comparatif sur l'activité métabolique (réductrice) des associations microbiennes (1.0 heure et 0.5 heure eau activée MRET et échantillons témoins) en environnement anaérobie : R — activité réductrice (en Témoin, 0.5 heure et 1.0 heure eau activée MRET), K — activité réductrice relative, V — volume de gaz dans les bouteilles.

Cette expérience a révélé que le temps optimal d'activation pour l'augmentation maximale de l'activité métabolique des associations microbiennes en environnement anaérobie était de 30 minutes. Le même temps optimal d'activation a été trouvé dans le processus d'inhibition de l'activité métabolique d'E.coli en environnement aérobie et dans une autre investigation concernant l'application de l'eau activée MRET pour le traitement préventif et l'amélioration de la résistance tumorale in vivo.

Cette investigation a révélé qu'à faible concentration initiale de cellules de culture microbiologique conditionnellement pathogène Escherichia coli K-12 en milieu nutritif à base d'eau activé pendant 30 minutes et 60 minutes, la croissance de la culture était inhibée 27 et 303 fois respectivement après les 25 heures d'expérience en environnement aérobie. Cette expérience a également révélé l'effet fort de l'eau activée MRET sur le processus de division des microorganismes E.coli, la modification des formes des cellules de culture et la taille des colonies. Il a été observé qu'une des raisons de la croissance anormalement faible de la population E.coli était liée à la modification du processus de division cellulaire dans le milieu nutritif activé MRET. Ces résultats permettent d'admettre que le processus d'activation MRET et l'effet stérilisant de l'eau MRET peuvent être appliqués dans l'industrie alimentaire et pour la purification de l'eau.

La deuxième étape de l'investigation a révélé que l'activité métabolique (réductrice) des bactéries E.coli était réduite jusqu'à 3 fois dans l'eau activée pendant 30 minutes et jusqu'à 1.6 fois dans l'eau activée pendant 60 minutes pendant les premières 6 heures d'expérience en environnement aérobie. Une autre expérience a montré que le processus d'activation MRET n'affectait pas l'activité réductrice des bactéries E.coli en environnement anaérobie et, par conséquent, ne devrait pas affecter une petite population de bactéries conditionnellement pathogènes, telles qu'E.coli, généralement présentes dans les associations microbiennes dans l'intestin du corps.

Afin de simuler les conditions environnementales similaires aux conditions dans l'intestin des humains et des animaux, le test sur l'activité métabolique des associations microbiennes complexes a été mené en environnement anaérobie. Il a été découvert que le processus activé MRET augmentait substantiellement l'activité réductrice des associations microbiennes complexes pendant les premières heures d'expérience. Le même temps optimal d'activation de 30 minutes a été observé dans le processus d'inhibition de l'activité métabolique des bactéries E.coli conditionnellement pathogènes en environnement aérobie et pour l'augmentation maximale de l'activité métabolique des associations microbiennes complexes en environnement anaérobie (présenté dans l'intestin). L'investigation précédente concernant l'application de l'eau activée MRET pour le traitement préventif et l'amélioration de la résistance tumorale en oncologie in vivo sur 500 souris a également montré les meilleurs résultats sur l'eau activée MRET pendant 30 minutes. Ainsi, cette investigation montre que l'ingestion d'eau MRET est bénéfique pour le processus de digestion et peut améliorer le métabolisme du corps.

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La recherche a été menée à l'Université Nationale Shevchenko de Kiev, Ukraine sur 400 souris. Les souris mâles de la lignée BALB âgées de 11 — 13 semaines et de poids 18 — 21 grammes ont été utilisées. Dans le processus d'investigation, toutes les souris ont été divisées en trois groupes. Avant l'inoculation de la culture Staphylococcus aureus Wood-46, un groupe de souris a consommé de l'eau MRET pendant 4 semaines (Groupe 1), un autre groupe a consommé de l'eau MRET pendant 2 semaines (Groupe 2), le groupe témoin a consommé de l'eau distillée ordinaire non activée. Pendant les 2 semaines suivantes d'expérience, les deux premiers groupes ont continué à consommer de l'eau MRET et le groupe témoin a consommé de l'eau distillée ordinaire. La première ligne d'expériences a été menée sur 225 souris afin d'analyser la persistance du pathogène dans l'homogénat de reins de souris comparant 5 groupes de souris (deux Groupe 1 et deux Groupe 2 sur eau activée MRET 15 minutes et 30 minutes et Témoin). Après les expériences préliminaires, l'eau activée MRET optimale de 30 minutes (distillée) a été choisie pour la ligne principale d'investigation.

Les propriétés protectrices significatives de l'eau MRET ont été confirmées par la diminution substantielle des UFC Staphylococcus (unités formant des colonies) dans l'homogénat de reins de souris sur eau MRET comparé au groupe témoin de souris suite à l'infection staphylococcique intrapéritonéale après les premières 24 heures. L'analyse des données au début des expériences mène à la conclusion que la diminution significative des colonies de pathogènes dans l'homogénat de reins de souris sur eau MRET ne commence qu'après 24 heures suite à l'inoculation de la culture Staphylococcus. Les résultats sur l'eau activée pendant 30 minutes étaient beaucoup meilleurs que sur l'eau activée pendant 15 minutes et toutes les expériences ultérieures ont été menées sur l'eau activée pendant 30 minutes.

Il n'y a eu aucun cas de mort animale dans tous les groupes investigués dans les premières 24 heures après l'inoculation intrapéritonéale de la culture Staphylococcus, ce qui est un résultat assez standard. Pendant les 8 jours suivants, 30% des animaux sont morts dans le groupe témoin, ce qui est également un résultat standard. Mais il n'y a eu aucun cas de mort dans les deux groupes de souris qui ont ingéré de l'eau activée MRET et c'est un résultat remarquable. Néanmoins, les principales conséquences de l'infection Staphylococcus ne se manifestent pas dans la mort des animaux comme dans le cas des maladies oncologiques. Le virus Staphylococcus affecte les systèmes vivants et les organes du corps. Ces microorganismes pathogènes causent des inflammations, des suppurations, des abcès, des furoncles, des angines, des conditions sceptiques, etc. C'est pourquoi une investigation détaillée du processus de stimulation par l'eau MRET des phagocytes et des organes lymphoïdes du système immunitaire de souris infectées par la culture Staphylococcus aureus a été menée et est présentée dans ce rapport.

L'inflammation locale a été induite à l'aide de l'inoculation de la culture Staphylococcus aureus dans la patte arrière gauche. La réaction inflammatoire ordinaire a été observée dans le groupe de souris sur eau non activée : le rougissement intense de la patte arrière gauche (Fig 1). Les deux groupes de souris sur eau MRET n'ont développé aucun rougissement de la patte arrière gauche inoculée avec la culture Staphylococcus aureus (Fig 2). Les résultats de cette expérience confirment le fait de l'inhibition substantielle de l'infection inflammatoire en cas de consommation régulière d'eau MRET.

4. La consommation d'eau MRET stimule l'activité du système phagocytaire et le niveau de résistance naturelle des animaux aux microorganismes pathogènes.

Pour la série suivante d'expériences, l'inoculation de Staphylococcus aureus Wood-46 a été menée intrapéritonéalement en dose LD30 afin de répandre l'infection dans tout le corps.

Le système phagocytaire est l'un des principaux facteurs de résistance naturelle non spécifique cellulaire aux infections et inflammations. C'est la première ligne de protection d'un organisme contre la pénétration et la reproduction de microorganismes pathogènes. Le rôle protecteur des cellules phagocytaires est basé sur leur capacité à identifier, engloutir et utiliser les agents étrangers pénétrés dans l'environnement interne d'un macro-organisme. La phagocytose est le mécanisme principal de résistance naturelle, surtout au premier stade du processus contagieux ; c'est une partie régulière de la formation de la réponse immunitaire spécifique.

La méthodologie la plus commune appliquée dans les études de l'activité fonctionnelle des phagocytes est l'examen de leur activité phagocytaire (engloutissement de cellules étrangères) et de leur activité bactéricide dépendante de l'oxygène. L'activité phagocytaire des neutrophiles et macrophages est estimée basée sur l'Indice de Phagocytose (pourcentage des phagocytes qui ont englouti des bactéries de test) et sur le Nombre Phagocytaire (nombre moyen de bactéries de test englouties par un phagocyte). Les cultures de Staphylococcus aureus et Latex sont généralement utilisées comme bactéries de test. L'activité bactéricide dépendante de l'oxygène des phagocytes est étudiée à l'aide du test NBT : une réduction dépendante de l'oxygène du Nitro Blue Tetrazolium en un Diformazan insoluble du dérivé Nitro Blue Tetrazolium par les phagocytes. À l'aide du test NBT, il est possible de distinguer les phagocytes activés des non activés.

L'eau MRET a stimulé les capacités phagocytaires des neutrophiles du sang périphérique et des macrophages péritonéaux, augmentant leur activité phagocytaire, particulièrement les Indices Phagocytaires (Fig 3A) et le Nombre Phagocytaire (Fig 3B). Elle a également stimulé leur activité bactéricide dépendante de l'oxygène, particulièrement l'augmentation de la quantité de phagocytes NBT-positifs (Fig 4).

Fig 3A : Indice Phagocytaire des neutrophiles et macrophages en deux semaines d'expérience (objet de phagocytose - Staphylococcus aureus) : 1 — Groupe témoin ; 2 — Souris sur eau MRET (préventif pendant 4 semaines) ; 3 — Souris sur eau MRET (préventif pendant 2 semaines).

Fig 3B : Nombre Phagocytaire des neutrophiles et macrophages en deux semaines d'expérience (objet de phagocytose — Staphylococcus aureus) : 1 — Groupe témoin ; 2 — Souris sur eau MRET (préventif pendant 4 semaines) ; 3 — Souris sur eau MRET (préventif pendant 2 semaines).

Fig 4 : Activité bactéricide dépendante de l'oxygène (test NBT) des neutrophiles et macrophages en deux semaines d'expérience :
1 — Groupe témoin ; 2 — Souris sur eau MRET (préventif pendant 4 semaines) ; 3 — Souris sur eau MRET (préventif pendant 2 semaines).

Ces expériences ont confirmé l'augmentation des potentiels effectifs des phagocytes qui constituent l'un des principaux facteurs de protection naturelle d'un organisme et initient la réponse immunitaire.

L'analyse des données au début des expériences mène à la conclusion que l'intensification significative de l'activité phagocytaire et bactéricide des macrophages et neutrophiles de souris sur eau MRET ne commence qu'après 24 heures suite à l'inoculation intrapéritonéale de la culture Staphylococcus. À la fin de deux semaines d'expérience, les valeurs moyennes des paramètres étudiés dans les deux groupes de souris sur eau MRET ont substantiellement augmenté comparé au groupe témoin. Les différences dans les valeurs moyennes des paramètres de l'activité fonctionnelle des phagocytes des groupes de souris consommant de l'eau MRET comparé au groupe témoin de souris sur eau non activée étaient statistiquement significatives avec p<0.05 (pour l'Indice Phagocytaire et le test NBT). Ces résultats confirment l'intensification significative de l'activité phagocytaire et bactéricide et de la réponse du système immunitaire suite à la consommation d'eau MRET.

Les différences dans les valeurs moyennes des paramètres étudiés pour les groupes de souris sur eau MRET comparé les uns aux autres étaient statistiquement insignifiantes, ce qui confirme la similarité du niveau d'effet bénéfique de l'eau MRET dans les deux groupes. Ce fait confirme également que la consommation régulière d'eau MRET fournit des bénéfices pour la santé dans un temps plutôt court (2 semaines dans le cas du modèle animal souris).

À la fin d'une autre série d'expériences dans les deux groupes de souris sur eau MRET, une augmentation substantielle statistiquement significative (p<0.05) du poids et de la cellularité (quantité de cellules) de la rate et des ganglions lymphatiques ainsi qu'une augmentation insignifiante du poids et de la cellularité du thymus (Fig 5 et Fig 6) ont été observées.

Fig 5 : Le poids des organes lymphoïdes en deux semaines d'expérience : 1 — Groupe témoin ; 2 — Souris sur eau MRET (préventif pendant 4 semaines) ; 3 — Souris sur eau MRET (préventif pendant 2 semaines).

Fig 6 : La cellularité des organes lymphoïdes en deux semaines d'expérience : 1 — Groupe témoin ; 2 — Souris sur eau MRET (préventif pendant 4 semaines) ; 3 — Souris sur eau MRET (préventif pendant 2 semaines).

Ces résultats confirment le fait de l'intensification significative de la réponse du système immunitaire chez les animaux sur eau MRET soumis à l'infection Staphylococcus. La différence dans les paramètres étudiés entre les groupes de souris sur eau MRET (4 semaines et 2 semaines de consommation préventive d'eau MRET) était insignifiante, ce qui confirme un effet bénéfique assez rapide de l'eau MRET sur l'activité immunitaire des organes lymphoïdes.

Au début de l'expérience, la cellularité et le poids des organes lymphoïdes dans les groupes MRET ne montraient pas de tendance distincte aux modifications. Il est raisonnable d'admettre que la consommation d'eau MRET affecte le poids et la cellularité des organes lymphoïdes seulement pendant la période d'infection.

L'analyse des données au début de l'expérience mène à la conclusion que des changements significatifs dans tous les paramètres étudiés de souris sur eau MRET (diminution des colonies de pathogènes dans l'homogénat de reins, augmentation du poids et de la cellularité des organes lymphoïdes, intensification de l'activité phagocytaire et bactéricide des macrophages et neutrophiles) ne commencent qu'après 24 heures suite à l'inoculation de la culture Staphylococcus. Autrement dit, la consommation d'eau MRET augmente les potentiels des capacités immunitaires du corps pour contrer les infections sans aucun changement dans les paramètres vitaux des organes et fonctions immunitaires avant la pénétration de pathogènes infectieux dans le corps.

À la fin de deux semaines d'expérience, les valeurs moyennes des paramètres étudiés dans les deux groupes de souris sur eau MRET (préventif pendant 4 et 2 semaines respectivement) ont significativement augmenté comparé au groupe témoin. Les différences dans les valeurs moyennes des paramètres étudiés des groupes de souris consommant de l'eau MRET comparé au groupe témoin de souris sur eau non activée étaient statistiquement significatives avec p<0.05 (pour la plupart des paramètres). Ces résultats confirment l'intensification significative de l'activité phagocytaire et de la réponse du système immunitaire suite à la consommation d'eau MRET.

Les différences dans les valeurs moyennes des paramètres étudiés pour les groupes de souris sur eau MRET comparé les uns aux autres étaient statistiquement insignifiantes, ce qui confirme la similarité du niveau de l'effet bénéfique de l'eau MRET dans les deux groupes. Ce fait confirme également que la consommation régulière d'eau MRET fournit des bénéfices pour la santé dans une période de temps plutôt courte (2 semaines dans le cas du modèle animal souris).

Les expériences suivantes ont été conçues pour étudier l'effet de l'activation MRET sur le processus de croissance et de développement de la culture Staphylococcus aureus Wood-46 in vitro en milieu nutritif (MPA — agar peptone-viande). La culture bactérienne a été cultivée pendant la nuit jusqu'à la phase stationnaire puis plaquée sur MPA sous forme de suspension à différentes densités d'inoculation. Le MPA avec culture a été activé MRET pendant différentes périodes de temps (activation pendant 15 minutes, 30 minutes, 45 minutes et 60 minutes respectivement) suivant les exigences de stérilité. Les boîtes de Petri avec milieu activé et non activé (MPA avec culture) ont été couvertes avec des couvercles en verre (environnement aérobie) et placées dans le thermostat pour la cultivation à une température de 37°C pendant 18-24 heures.

Après la cultivation, les propriétés morphologiques et tinctoriales des cultures ont été observées et les nombres de colonies cultivées sur MPA ont été comptés. L'activité bactériostatique du milieu nutritif activé MRET (MPA) a été mesurée comme un Indice d'Activité Bactériostatique (IAB). Un Indice d'Activité Bactériostatique est défini comme un coefficient de l'inhibition de la croissance et de la reproduction de pathogènes en milieu bactériostatique, particulièrement en milieu nutritif activé MRET. Il est calculé comme réduction du nombre de colonies (UFC — Unités Formant des Colonies) en milieu activé MRET lié aux échantillons témoins non exposés à l'activation :

IAB = (N_témoin — N_act)/N_témoin
où N — nombre de colonies bactériennes (UFC) en milieu nutritif Témoin (non activé) et activé MRET, respectivement.

Afin de vérifier la stérilité des expériences, les boîtes de Petri avec milieu nutritif (MPA) sans culture staphylococcique ont été exposées au processus d'activation puis gardées dans le thermostat. Aucune colonie de culture n'a été observée, ce qui confirme la stérilité de l'environnement.

Suite à l'investigation, une corrélation directe entre les temps d'activation (tact), les concentrations initiales de culture staphylococcique (N₀) et un nombre de colonies cultivées sur milieu activé MRET a été observée. Les résultats sont présentés ci-dessous sous forme d'une série de photos de boîtes de Petri avec les colonies cultivées sur surfaces MPA et les diagrammes suivants basés sur les données de ces expériences (Fig 7 — 12).

Dans le processus d'investigation, l'effet de l'activation MRET sur la croissance de culture staphylococcique à plutôt faible concentration initiale de pathogènes a été analysé. Les données correspondant à des concentrations initiales plus élevées N0 > 10³ bactéries/ml n'ont pas été analysées en raison des difficultés liées au calcul de valeurs très élevées d'un nombre de colonies, malgré le fait de la haute activité bactériostatique du milieu nutritif activé MRET en cas de concentrations initiales élevées.

L'effet bactériostatique hautement significatif de 92 — 93% a été observé après activation MRET pendant 30 minutes et plus de cultures avec concentration initiale N₀ = 10³ bactéries/ml (Fig 7 et 8) et de 70 — 90% avec concentration initiale de N₀ = 10² bactéries/ml (Fig 9 et 10). En cas de cultures avec faible concentration initiale N₀ = 10 bactéries/ml, l'activité bactériostatique en milieu nutritif activé pendant 15 minutes a dépassé 93% et en milieu nutritif activé pendant 30 minutes, une inhibition 100% des colonies staphylococciques a été observée (Fig 11 et 12).

Fig 7 : L'effet de la durée de temps d'activation MRET sur l'inhibition de la croissance de culture de Staphylococcus aureus Wood-46 avec concentration initiale de culture N₀ = 10³ bactéries/ml.

Fig 8 : L'effet de la durée de temps d'activation MRET sur l'inhibition de la croissance de culture de Staphylococcus aureus Wood-46 avec concentration initiale de culture N₀ = 10³ bactéries/ml. IAB — Indice d'Activité Bactériostatique (réduction du nombre de colonies lié aux échantillons témoins non exposés à l'activation).

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Fig 9 : L'effet de la durée de temps d'activation MRET sur l'inhibition de la croissance de culture de Staphylococcus aureus Wood-46 avec concentration initiale de culture N₀ = 10² bactéries/ml.

Fig 10 : L'effet de la durée de temps d'activation MRET sur l'inhibition de la croissance de culture de Staphylococcus aureus Wood-46 avec concentration initiale de culture N₀ = 102 bactéries/ml. IAB — Indice d'Activité Bactériostatique (réduction du nombre de colonies lié aux échantillons témoins non exposés à l'activation).

Fig 11 : L'effet de la durée de temps d'activation MRET sur l'inhibition de la croissance de culture de Staphylococcus aureus Wood-46 avec concentration initiale de culture N₀ = 10 bactéries/ml.

Fig 12 : L'effet de la durée de temps d'activation MRET sur l'inhibition de la croissance de culture de Staphylococcus aureus Wood-46 avec concentration initiale de culture N₀ = 10 bactéries/ml. IAB — Indice d'Activité Bactériostatique (réduction du nombre de colonies lié aux échantillons témoins non exposés à l'activation).

1. L'activation MRET du milieu nutritif à base d'eau avec culture staphylococcique en suspension mène à l'origine d'une haute activité bactériostatique du milieu nutritif qui dépend de la durée de temps d'activation et de la concentration initiale de cellules de culture.

2. L'activité bactériostatique augmente suite à l'augmentation du temps d'activation (les temps d'activation jusqu'à 60 minutes ont été étudiés).

3. L'efficacité de l'activité bactériostatique augmente suite à la diminution de la concentration initiale de la suspension de culture staphylococcique. Le processus d'activation MRET est le plus efficace sur les suspensions de culture avec la concentration pas plus de 10³ bactéries/ml.

4. Les résultats de l'investigation fournissent la preuve concernant la haute efficacité de l'activation MRET sur l'inhibition de la croissance des colonies et de la reproduction des microorganismes staphylococciques in vitro. Ces résultats permettent d'admettre que le processus d'activation MRET et l'effet stérilisant de l'eau MRET peuvent être appliqués dans l'industrie alimentaire et pour la purification de l'eau.

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Dans ce cas particulier, l'échantillon de sang du sujet avant l'ingestion d'Eau Activée montre une attaque de radicaux libres sur les cellules. Notez les cellules sanguines «épineuses» qui prennent presque 90% de l'échantillon. 30 minutes plus tard, après l'ingestion d'Eau Activée, l'échantillon de sang montre un environnement non radicalaire libre.

Dans ce cas particulier, l'échantillon de sang du sujet avant l'ingestion d'Eau Activée montre la formation dite de Rouleau lorsque les cellules sanguines sont empilées, formant un motif en forme de ver. 30 minutes plus tard, après l'ingestion d'Eau Activée, la plupart des motifs en forme de ver se sont brisés, formant des motifs individuels de sphères bien rondes.

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Les examens de l'influence de l'eau activée MRET sur les plantes ont été menés pendant une période de 3 mois à l'Institut de Génétique des Plantes de Kiev de l'Académie des Sciences d'Ukraine sous la supervision du Prof. V. Vysotskii, Université Nationale de Kiev. L'eau activée MRET a accéléré le processus de germination des graines de plusieurs plantes (particulièrement du chou, de la citrouille, du haricot vert, du radis de jardin et des pois) et a amélioré leur cycle de croissance.